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琼脂糖凝胶电泳涉及的步骤
为了制备凝胶,将琼脂糖粉与电泳缓冲液混合至所需浓度,并在微波炉中加热使其熔化。
琼脂糖凝胶浓度
所用琼脂糖的百分比取决于要分离的片段的大小。
琼脂糖的浓度是指琼脂糖相对于缓冲液体积的百分比(w / v),琼脂糖凝胶通常在0.2%至3%的范围内。
琼脂糖浓度越低,DNA片段迁移越快。
通常,如果目的是分离大的DNA片段,则应使用低浓度的琼脂糖,如果目的是分离小的DNA片段,则建议使用高浓度的琼脂糖。
将溴化乙锭添加到凝胶中(**终浓度为0.5 ug / ml),以促进电泳后DNA的可视化。
将溶液冷却至约60°C后,将其倒入装有样品梳子的浇铸盘中,使其在室温下固化。
凝胶固化后,将梳子移开,注意不要撕裂孔的底部。
仍在塑料托盘中的凝胶水平插入
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并用缓冲液覆盖。
然后将含有DNA与上样缓冲液混合的样品吸移到样品孔中,将盖子和电源线放在设备上,并施加电流。
可以通过观察电极上的气泡确认电流。
鉴于其负电荷,DNA将迁移至通常为红色的正电极。
DNA迁移到凝胶中的距离可以通过肉眼监测跟踪染料(如溴酚蓝和二甲苯氰染料)的迁移来判断。
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琼脂糖凝胶电泳的要求/仪器
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